這種深紅色的熒光鬼筆環(huán)肽綴合物與F-肌動蛋白選擇性結(jié)合，其光穩(wěn)定性比熒光素-鬼筆環(huán)肽綴合物要高得多。鬼筆環(huán)肽衍生物經(jīng)常以納摩爾濃度使用，常在甲醛固定和透化的組織切片、細胞培養(yǎng)或無細胞實驗中用于標記、鑒定和定量F-肌動蛋白的便捷探針。鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白絲的結(jié)合比與肌動蛋白單體的結(jié)合要緊密得多，從而導致肌動蛋白亞基從絲端解離的速率常數(shù)降低，從而通過防止絲解聚而基本穩(wěn)定了肌動蛋白絲。而且，發(fā)現(xiàn)鬼筆環(huán)肽抑制F-肌動蛋白的ATP水解活性。鬼筆環(huán)肽在細胞中不同濃度下的功能不同。當以低濃度引入細胞質(zhì)時，鬼筆環(huán)肽將聚合度較低的胞質(zhì)肌動蛋白和纖維蛋白吸收到聚集的肌動蛋白聚合物的穩(wěn)定“島"中，但它不會干擾應力纖維，即厚的微絲束。鬼筆環(huán)肽的性質(zhì)是研究F-肌動蛋白在細胞中分布的有效工具，方法是用熒光類似物標記鬼筆環(huán)肽并將其用于染色肌動蛋白絲以進行光學顯微鏡觀察。鬼筆環(huán)肽的熒光衍生物已被證明在定位活細胞或固定細胞中的肌動蛋白絲以及體外觀察單個肌動蛋白絲方面非常有用。熒光鬼筆環(huán)肽衍生物已被用作高分辨率研究肌動蛋白網(wǎng)絡的重要工具。

常在甲醛固定和透化的組織切片、細胞培養(yǎng)或無細胞實驗中用于標記、鑒定和定量F-肌動蛋白的便捷探針。

1.將30μLDMSO加入粉末小瓶中。

2.將 1 μL 的鬼筆環(huán)肽SF 647綴合溶液添加到 1 mL含1% BSA 的 PBS 中。

注意1：鬼筆環(huán)肽綴合物未使用的儲備溶液應等分并儲存在-20℃，避光。

注意2：不同的細胞類型可能染色不同。鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液的濃度的制備需要根據(jù)實際而定。

3.染色細胞：

3.1執(zhí)行甲醛固定，在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會在固定過程中破壞肌動蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

3.2用PBS沖洗固定細胞2-3次。

3.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細胞3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細胞2-3次。

3.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液加入固定的細胞中，并在室溫下染色細胞20至90分鐘。

3.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以除去過量的鬼筆環(huán)肽綴合物，然后在顯微鏡下進行，密封和成像。

在微孔板孔中制備樣品

從樣品中取出液體

添加鬼筆環(huán)肽SF 647標記溶液（100μL/孔）

在室溫下染色細胞20至90分鐘

清洗細胞在顯微鏡下觀察樣品

注意：將小瓶加熱至室溫并在打開前短暫離心。

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標題:Glycated ECM Derived Carbon Dots Inhibit Tumor Vasculogenic Mimicry by Disrupting RAGE Nuclear Translocation and Its Interaction With HMGB1

成員:Shaoting Zheng, Xiaoyan Zhang, Fan Yang, Zhi Chang, Jingxia Han, Heng Zhang, Huijuan Liu, Tao Sun

論文因子:27.4 發(fā)表期刊:ADVANCED MATERIALS pmid:40159891

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標題:Microbial Tryptophan Metabolites Ameliorate Ovariectomy-Induced Bone Loss by Repairing Intestinal AhR-Mediated Gut-Bone Signaling Pathway

成員:Chuan Chen, Zheng Cao, Hehua Lei, Cui Zhang, Mengjing Wu, Shaohua Huang, Xinzhi Li, Denghui Xie, Maili Liu, Limin Zhang, Gang Chen

論文因子:14.3 發(fā)表期刊:Advanced Science pmid:39041942

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標題:Long-Term Triclocarban Exposure Induced Enterotoxicity by Triggering Intestinal AhR-Mediated Inflammation and Disrupting Microbial Community in Mice

成員:Yuchen Song, Hehua Lei, Zheng Cao, Cui Zhang, Chuan Chen, Mengjing Wu, Huabao Zhang, Ruichen Du, Liu Lijun, Xiaoyu Chen, Limin Zhang

論文因子:4.1 發(fā)表期刊:CHEMICAL RESEARCH IN TOXICOLOGY pmid:38525689

注意：以上文獻 僅供參考

SF647標記鬼筆環(huán)肽

SF647標記鬼筆環(huán)肽