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產(chǎn)品名稱:2,2- 聯(lián)喹啉- 4,4- 二甲酸二鈉BCA 蛋白定量

產(chǎn)品型號:PC0022-Solarbio

產(chǎn)品報價:

產(chǎn)品特點:2,2- 聯(lián)喹啉- 4,4- 二甲酸二鈉BCA 蛋白定量
堿性條件下,蛋白將Cu2+還原為Cu+, Cu+與BCA試劑形成紫藍色的絡(luò)合物,測定其在562nm處的吸收值,并與標(biāo)準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS,Triton X-100,Tween不影響檢測結(jié)果,但受螯合劑(EDTA, EGTA)

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PC0022-Solarbio2,2- 聯(lián)喹啉- 4,4- 二甲酸二鈉BCA 蛋白定量的詳細資料:

2,2- 聯(lián)喹啉- 4,4- 二甲酸二鈉BCA 蛋白定量

操作說明:

一. 微孔酶標(biāo)儀法

1. 配制工作液:根據(jù)標(biāo)準品和樣品數(shù)量,按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑(50:1)配制成BCA工作液,充分混勻(混合時可能會有渾濁,但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2. 稀釋標(biāo)準品:取10μL BSA標(biāo)準品用PBS稀釋100μL(樣品一般可用PBS稀釋),使終濃度為0.5mg/mL。將標(biāo)準品按0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μL加到96孔板的蛋白標(biāo)準品孔中,加PBS補足20μL。

3. 將樣品作適當(dāng)稀釋(建議多做幾個梯度,如作2倍、4倍、8倍稀釋),加20μL到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量樣品時誤差偏大,標(biāo)準線前面的點可能不很準確,所以盡可能的讓樣品點落在標(biāo)準線1/2后。

4. 各孔加入200μL BCA工作液,37℃放置15-30分鐘。用酶標(biāo)儀測定A562nm,根據(jù)標(biāo)準曲線計算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時,應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測結(jié)果。

二. 分光光度計法 如沒有酶標(biāo)儀,可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。 步驟如下:

1. 配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準品和樣品數(shù)量,按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑(50:1)配制成BCA工作液,充分混勻(混合時可能會有渾濁,但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。

2. 稀釋標(biāo)準品:取100μL BSA標(biāo)準品用PBS稀釋1mL(樣品一般可用PBS稀釋),使終濃度為0.5mg/mL。

3. 取八支(或者更多)5mL離心管,標(biāo)上號,按下表加入試劑。

 

4.37℃放置15-30分鐘。用分光光度計測562nm處吸光值,根據(jù)標(biāo)準曲線計算出蛋白濃度。

注意事項:

1. 長期不用時,Cu試劑與PBS稀釋液可置于2-8℃保存,如發(fā)現(xiàn)細菌污染則應(yīng)丟棄。BCA試劑在低溫條件下出現(xiàn)結(jié)晶沉淀時,可37℃溫育使其*溶解, 不影響使用。

2. 樣品中若含有較多干擾物質(zhì)時,請采用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

3. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 參考文獻:
《Endometrial mesenchymal stem cells isolated from menstrual blood repaired epirubicin-induced damage to human ovarian granulosa cells by inhibiting the expression of Gadd45b in cell cycle pathway》 作者:Zhongrui Yan?, Fengyi Guo?, Qing Yuan?, Yu Shao?, Yedan Zhang?, Huiyan Wang?, Shaohua Hao and Xue Du authorView ORCID ID profile 期刊:Stem Cell Research & Therapy 影響因子:4.963 PMID:30606243

 

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