細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)使用說明
產(chǎn)品說明：自噬(autophagy)是細胞受到刺激后吞噬自身的細胞質(zhì)或細胞器，終將吞食物在溶酶體內(nèi)降解的過程，自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含細胞質(zhì)、長壽蛋白質(zhì)和異常蛋白聚集物，損傷或多余細胞器如線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和微體、病毒和細菌等。單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，通常被用于檢測自噬體形成的特異性標記染色劑，其檢測激發(fā)濾光片波長 355nm。阻斷濾光片波長 512nm。細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC 法)，適用于培養(yǎng)細胞的自噬染色，又稱為 MDC 染色液，可與 EB 合用雙染。
操作步驟(僅供參考)：
(一)、MDC單獨染色：
1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。
2、 800g離心5min，收集細胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次，棄上清。
3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細胞，計數(shù)并調(diào)節(jié)細胞濃度10 6 /ml。
4、 取適量90μl的細胞懸液新的EP管中，加入10μl的MDC Stain，輕輕混勻。
5、 室溫避光染色15～45min。
6、 800g離心5min，收集細胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞2次，棄上清。
7、 加入100μl的Collection buffer重懸細胞，滴加于載玻片上并加蓋玻片。
8、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長355nm，阻斷濾光片波長512nm)，計數(shù)并拍照。
(二)、與EB雙染色：
1、 用去離子水稀釋10×Wash buffer1×。
2、 800g離心5min，收集細胞，用300～400μl的1×Wash buffer清洗細胞1次，棄上清。
3、 加入適量的1×Wash buffer重懸細胞，計數(shù)并調(diào)節(jié)細胞濃度10 6 /ml。
4、 取適量90μl的細胞懸液新的EP管中，分別加入10μl的MDC Stain和0.2μM EB染色液，輕輕混勻。
5、 滴加于在玻片上，室溫避光染色15～30min，加蓋玻片。
6、 熒光顯微鏡下觀察(激發(fā)濾光片波長512nm)，計數(shù)并拍照。
染色結(jié)果：正常細胞 細胞被均勻染成黃綠色熒光凋亡細胞 染色質(zhì)濃縮，細胞核碎裂成點狀，被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒。
注意事項：
1、 MDC Stain和EB試劑有一定毒性，請小心操作。
2、 吖啶橙染色常與EB染色合用，可區(qū)分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。
3、 操作過程中應(yīng)注意減少試劑暴露于強光下的時間。
4、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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